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        飼料澱粉糊化度測定

        文章來源:互聯網 作者: 更新時間:2013-07-12

          試劑:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          1. 聯甲苯胺(o-Toluidine)試劑:溶解1.5g硫脲于940ml冰醋酸,家60ml甲苯胺,存于有色玻璃瓶中。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          2. 乙酸鈉緩沖液:溶解4.1g無水乙酸鈉與1L蒸餾水,用乙酸調pH至4.5。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          3. 葡萄糖澱粉酶溶液:將2g根黴葡萄糖澱粉酶(目錄號No.A-7255,Sigma Chemical Co.供貨)分散于250ml乙酸緩沖液,用玻璃棉濾紙(Whaatman No.GF/A)迅速過濾,限2小時內使用。葡萄糖澱粉的特異活性是在pH4.5,溫度40℃下生成28.4umol葡萄糖/min/mg蛋白。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          操作規程:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          1. 制備澱粉部分糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的5ml蒸餾水中。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          2. 制備澱粉完全糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的3ml蒸餾水和1ml 1N NaOH中。5分鍾後加1ml 1N HCl。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          3. 葡萄糖澱粉酶水解和測定葡萄糖。每個離心管加250ml葡萄糖澱粉酶溶液,40℃保溫30min。加2ml 25%的三氯乙酸鈍化葡萄糖澱粉酶(並使該酶和其他蛋白沉澱),以16,000×g離心5min。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          4. 取0.5ml上清液于試管中,加入4.5ml聯甲苯胺(o-Toluidine)試劑,將試管置沸水中10min,用冷水冷卻,加5ml冰醋酸,測定在63.nm的吸收率。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          按下式計算澱粉糊化度:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          Y=100*(B-K)/ (A-K)kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          K=A*(C-B) / (A-2B+C)kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          其中,A=全糊化澱粉的吸收率;kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          B= 全糊化澱粉和經過30min的酶水解的完全澱粉混合物的吸收率;kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          C= 部分糊化澱粉和經過60 min的酶水解的完全澱粉混合物的吸收率;kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          K= 1%完整澱粉經過30min水解後的吸收率。這對每種澱粉或特定處理的澱粉是一個常數,常規分析中只需測=定一次。kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          這規程也可用來計算總澱粉%;用葡萄糖溶液(720ug/ml)制定標准曲線。按前法第kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          2步和第3步驟處理樣品,根據標准曲線讀取葡萄糖濃度。按下式計算澱粉含量:kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          澱粉總量%=葡萄糖*0.9*100/樣品重(幹基)kxQ中國飼料行業信息網-立足飼料,服務畜牧

          
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